罗非鱼湖病毒(TiLV)是一种类似正粘病毒的新型RNA病毒。据报道，它是一种新出现的病毒，在以色列、厄瓜多尔、哥伦比亚和埃及引起罗非鱼合胞体肝炎(SHT) (Ferguson et al. 2014;Eyngor et al. 2014;Bacharach等人，2016;Del-Pozo等人2017年，Fathi等人2017年)。该疾病导致养殖罗非鱼的死亡率高达90%，被认为是对全球罗非鱼养殖的潜在威胁(Eyngor et al. 2014)。

在泰国罗非鱼养殖场，最近发生了与高累积死亡率(20-90%)相关的疾病暴发，我们发现患病鱼表现出典型的SHT组织病理学特征。感染已经通过透射电镜(TEM)、原位杂交和高核苷酸序列鉴定证实来自以色列的TiLV (Dong et al. 2017)。我们的研究进展被Eyngor等人(2014)发表的嵌套式RT-PCR引物序列和Tsofack等人(2016)发表的详细RT-PCR协议延迟。我们使用之前的报告(Eyngor et al. 2014)进行了初步检测，假设PCR条件(未在出版物中指定)导致非特异性鱼类基因的扩增。这可能是因为引物“嵌套的ext-2”的20个核苷酸中有13-18个与fish基因匹配。因此，我们通过省略引物“嵌套的ext-2”以避免假阳性结果，将嵌套的RT-PCR协议修改为半嵌套的RT-PCR。

下面给出的半嵌套RT-PCR方法可用于非商业应用程序检测TiLV。严重感染样本将产生2扩增子频段的415个基点和250个基点,而lightly-infected样品将生成一个250 - bp扩增子带(图1)。由于这是第一次报告的TiLV在亚洲,作者敦促亚洲鱼卫生实验室测试TiLV罗非鱼死亡率异常发生时。请联系Centex虾(saengchan 'at' biotec.or.th)获取阳性对照质粒(pGEM-415_bp)，该质粒将免费提供给非商业组织，并向私营部门收取一定的费用。